Microdissezione laser: una tecnica per isolare le cellule tumorali del colon-retto invasive da un modello di coltura organotipica 3D

- I modelli organotipici 3D del cancro del colon-retto sono colture in vitro ingegnerizzate per imitare i microambienti tumorali in vivo. La coltura contiene spesso cellule stromali, come i fibroblasti, co-coltivate con cellule epiteliali del cancro del colon-retto, in un microambiente di matrice extracellulare adatto.

Nelle colture consolidate, le cellule tumorali con potenziale metastatico invadono la matrice extracellulare. Per isolare queste cellule invasori, in primo luogo, trattare il modello organotipico con formaldeide per fissare le cellule e la matrice extracellulare. Incubare con alcol per disidratare il campione.

Quindi, incorporare la cera di paraffina liquida per generare un blocco di tessuto. Utilizzare un ultramicrotomo per ottenere sezioni tagliate sottilmente. Montare le sezioni su un apposito vetrino.

Aggiungi lo xilene per deparaffinare le sezioni. In sequenza, incubare le sezioni in concentrazioni decrescenti di etanolo per reidratare i campioni.

Trattare con Cresyl Violet per colorare e differenziare le cellule tumorali del colon-retto dal microambiente. Posizionare il vetrino colorato rivolto verso il basso sul tavolino del microscopio. Utilizzando un softwar