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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:52 min. • July 8th, 2025
Gli estrogeni sono ormoni steroidei che agiscono come molecole di segnalazione endocrina e si legano ai recettori nucleari beta, i recettori degli estrogeni beta, formando complessi di recettori estrogeno-beta.
Questi complessi ligando-recettore dimerizzano e formano omodimeri nel citoplasma cellulare. L'omodimero risultante entra nel nucleo, si lega all'elemento di risposta agli estrogeni, ERE - una specifica sequenza di DNA all'interno del promotore del gene bersaglio - e avvia la trascrizione.
Per determinare l'attività estrogenica dei fitoestrogeni, metaboliti secondari di origine vegetale che imitano la funzione degli estrogeni, iniziare con una piastra a più pozzetti contenente cellule reporter sospese in un mezzo appropriato.
Le cellule reporter sono ingegnerizzate per sovraesprimere i recettori degli estrogeni beta e trasfettate con un gene della luciferasi fuso al promotore ERE. Aggiungere la soluzione campione contenente fitoestrogeni e incubare.
Durante l'incubazione, il fitoestrogeno si lega ai recettori degli estrogeni, beta - espressi nelle cellule reporter. Una volta legati, i complessi fitoestrogeno-recettore si dimerizzano e si traslocano nel nucleo.
All'interno de
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