JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:11 min. • July 8th, 2025
La metilazione del DNA è una modificazione epigenetica che comporta l'aggiunta di un gruppo metilico alla base citosinica del DNA per formare la 5-metilcitosina. Questa modifica altera l'espressione genica.
Per quantificare la metilazione del DNA tramite dot-blot, prelevare campioni di DNA genomico derivati da condrociti umani a vari stadi di dedifferenziazione che mostrano diversi livelli di citosina metilata.
Trattare i campioni di DNA con idrossido di sodio, un alcali forte, e riscaldarli. Questo trattamento rompe i legami idrogeno tra i due filamenti di DNA, con conseguente denaturazione del DNA. Aggiungere acetato di ammonio per neutralizzare l'alcali, prevenendo un'eccessiva degradazione del DNA.
Prelevare una membrana di nylon e individuare i campioni di DNA denaturato sotto forma di punti. Il DNA caricato negativamente si lega alla membrana di nylon caricata positivamente tramite interazioni elettrostatiche, provocando il suo blotting sul supporto solido.
Trattare la membrana tamponata con un tampone bloccante per evitare il legame aspecifico. Quindi, aggiungere gli anticorpi anti-5-metilcitosina alla membrana e incubare. Questi anticorpi si legano esclusivamente alla citos
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici