Rilevamento di proteine virali nel tessuto cerebrale di topo infetto da virus della rabbia

Raccogli sezioni cerebrali fisse da topi infetti dal virus della rabbia intracerebrale a intervalli post-mortem definiti.

Il virus infetta i neuroni piramidali nella corteccia cerebrale e le proteine virali espresse si localizzano all'interno di strutture granulari intracitoplasmatiche note come corpi di inclusione.

Trattare le sezioni con cloruro di ammonio per neutralizzare i gruppi reattivi indotti dalla fissazione e ridurre al minimo la colorazione di fondo.

Immergere le sezioni in perossido di idrogeno per inattivare la perossidasi endogena e ridurre i segnali aspecifici.

Applicare una soluzione bloccante contenente un detergente per permeabilizzare le membrane cellulari e mascherare i siti di legame aspecifici.

Incubare con anticorpi primari specifici per le proteine virali.

Lavare e incubare con anticorpi secondari coniugati con biotina che si legano agli anticorpi primari.

Lavare nuovamente e introdurre avidina coniugata con l'enzima perossidasi, che si lega alla biotina, seguita da un substrato cromogenico che l'enzima converte in un prodotto colorato.

Visualizzare i corpi di inclusione immunoreattivi contenenti proteine virali utilizzando un microscopio.

Con l'aumento del tempo post mortem, la degradazione neuronale e la scomparsa dei corpi inclusi diventano evidenti.