Microscopia elettronica a trasmissione di granuli di lipofuscina nei neuroni

Inizia con il tessuto corticale prefissato, dove i neuroni contengono granuli di lipofuscina. Questi granuli ricchi di lipidi si accumulano con l'invecchiamento e sono associati a condizioni neuropatologiche.

Trattare il tessuto con tetrossido di osmio per stabilizzare le strutture cellulari, compresa la lipofuscina.

Trattare il tessuto con concentrazioni crescenti di etanolo per disidratarlo. Quindi, incorporalo nella resina e taglia sezioni ultrasottili per rivelare le strutture neuronali.

Montare la sezione su una griglia di rame non rivestita.

Colorare la sezione con acetato di uranile, una macchia di metallo pesante.

Gli ioni uranile interagiscono con le biomolecole cellulari, inclusi lipidi, proteine e DNA.

Successivamente, colorare il tessuto con citrato di piombo, che interagisce debolmente con gli ioni uranile prelegati, aumentando il contrasto sullo sfondo.

Posizionare la fetta colorata sotto un microscopio elettronico a trasmissione per esporla a un fascio di elettroni focalizzato.

Le biomolecole colorate arricchite con coloranti di metalli pesanti, disperdono gli elettroni fortemente rispetto allo sfondo.

I granuli di lipofuscina appaiono come grappoli irregolari e dens