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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:30 min • March 4th, 2025
Ottenere tessuto del midollo spinale fissato chimicamente da topi indotti con demielinizzazione autoimmune in punti temporali definiti durante la progressione della malattia.
La malattia innesca le cellule immunitarie autoreattive ad attaccare le proteine della mielina, degradando la guaina mielinica che circonda gli assoni neuronali.
Le cellule precursori degli oligodendrociti vengono reclutate nel sito interessato, maturano in oligodendrociti e riformano la guaina mielinica.
Sciacquare il tessuto con un tampone per rimuovere il fissativo in eccesso, quindi trattarlo con osmio, che si lega ai lipidi mielinici e migliora il contrasto per l'imaging.
Applicare coloranti di metalli pesanti che si legano alle macromolecole e migliorano il contrasto.
Disidratare il tessuto utilizzando concentrazioni crescenti di alcol. Prendi il tessuto incorporato nella resina e ottieni sezioni ultrasottili.
Utilizzando la microscopia elettronica, misurare lo spessore della guaina mielinica per classificare gli assoni come demielinizzanti con una guaina rigonfia e più spessa, demielinizzati senza guaina o rimielinizzanti con una guaina sottile.
Identificare il danno assonale caratterizzato da una ridotta spaziatura tra i neurofilamenti e mitocondri gonfi o degenerazione completa.
Analizzare la progressione del danno assonale e la riparazione nel tempo per valutare la progressione della malattia.