JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:25 min. • March 4th, 2025
Prendi sezioni fisse del nervo ottico da un ratto di controllo e da un ratto con lesione del nervo ottico.
La sezione di controllo presenta assoni con guaine mieliniche strettamente impacchettate contenenti strati concentrici di membrana plasmatica. La sezione lesa presenta mielina decompattata con ampi spazi vuoti.
Incubare con un complesso osmio-ferrocianuro che si lega ai lipidi e migliora il contrasto della guaina mielinica.
Trattare con tiocarbobidrazide per creare ulteriori siti di legame per l'osmio.
Riapplicare l'osmio per migliorare ulteriormente il contrasto lipidico.
Colorare con metalli pesanti, che si legano alle macromolecole e migliorano il contrasto strutturale.
Disidratare con concentrazioni crescenti di alcol e risciacquare con acetone per l'incorporazione della resina.
Incorporare il tessuto nella resina e rivestire la resina con l'oro per migliorare la qualità dell'immagine.
Utilizzare la microscopia elettronica a scansione seriale a blocchi per affettare e visualizzare simultaneamente. Focalizza il fascio di elettroni sulla superficie e rileva gli elettroni retrodiffusi per generare immagini.
Le guaine mieliniche appaiono scure, mentre gli spazi all'interno delle guaine danneggiate appaiono più chiari, consentendo la differenziazione tra mielina normale e danneggiata.