Rilevamento di proteine tau fosforilate in campioni di cervello di topo mediante analisi Western Blot

Inizia con un tessuto cerebrale di topo in un tampone di estrazione contenente inibitori della proteasi e un detergente.

Omogeneizzare il tessuto per rilasciare le proteine nel tampone. Gli inibitori della proteasi bloccano l'attività della proteasi, impedendo la degradazione delle proteine.

Centrifugare e raccogliere il surnatante con le proteine.

Aggiungere un tampone di caricamento contenente detersivo e un agente riducente per denaturare la proteina.

Caricare le proteine dal controllo e il campione su un gel SDS-PAGE. Applicare un campo elettrico per separare le proteine in bande distinte.

Dopo l'elettroforesi, trasferire le bande proteiche su una membrana.

Trattare la membrana con un tampone contenente latte scremato per bloccare i siti di interazione aspecifici.

Incubare con anticorpi primari che si legano specificamente alle proteine tau fosforilate.

Lavare e incubare con anticorpi secondari coniugati con enzimi.

Aggiungere un substrato che reagisce con l'enzima per produrre un segnale luminoso, confermando le proteine tau fosforilate.

Un'intensa banda luminosa nel campione rispetto al controllo suggerisce una patologia neurodegenerativa.