Rilevamento immunoistochimico di corpi di Lewy in una sezione di tessuto cerebrale umano malato

Prendi una sezione reidratata di tessuto cerebrale umano malato contenente corpi di Lewy, o LB.

Incubare con una soluzione di perossido di idrogeno per inibire le perossidasi endogene e prevenire la colorazione aspecifica.

Riscaldare la sezione in tampone citrato per smascherare gli epitopi dell'alfa-sinucleina nei LB.

Applicare un agente bloccante per prevenire il legame non specifico degli anticorpi.

Rimuovere l'agente bloccante in eccesso e incubare la sezione con anticorpi primari che hanno come bersaglio l'alfa-sinucleina.

Lavare via gli anticorpi non legati.

Applicare anticorpi secondari biotinilati che si legano agli anticorpi primari.

Rimuovere gli anticorpi in eccesso.

Aggiungere complessi streptavidina-biotina-perossidasi, che si legano agli anticorpi secondari biotinilati.

Lavare via i complessi non legati.

Applicare un substrato che produce colore e che reagisce con la perossidasi, formando precipitati marroni.

Rimuovere il substrato in eccesso.

Trattare con un colorante di contrasto per colorare i nuclei di blu, migliorando il contrasto contro l'alfa-sinucleina colorata di marrone all'interno dei LB nel citoplasma neuronale al microscopio.