JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:29 min • March 4th, 2025
Prendiamo sezioni cerebrali fissate chimicamente ottenute da un modello murino femmina della malattia di Alzheimer.
Queste sezioni contengono grovigli neurofibrillari, aggregati anormali di proteina tau che si trovano all'interno dei neuroni dell'ippocampo.
Lavare le sezioni con tampone, quindi con acqua deionizzata.
Trattare con acido periodico per ossidare i gruppi glicosilici associati agli aggregati, formando gruppi aldeidici.
Lavare con acqua deionizzata e aggiungere una soluzione alcalina di ioduro d'argento. Gli ioni d'argento formano complessi con le aldeidi, creando siti di nucleazione.
Lavare con un acido debole diluito per rimuovere l'argento non legato e neutralizzare il pH.
Risciacquare con acqua deionizzata.
Aggiungere una soluzione di sviluppo refrigerata contenente un agente riducente per convertire gli ioni d'argento in argento metallico, producendo un colore marrone chiaro.
Risciacquare con un acido debole diluito per fermare lo sviluppo.
Montare le sezioni, disidratarle con concentrazioni di alcol crescenti e applicare un mezzo di montaggio.
Sigillare le sezioni con un vetrino coprioggetti.
Utilizzando un microscopio ottico, visualizzare i grovigli neurofibrillari.