JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:27 min. • March 4th, 2025
Isolare il nervo ottico da topi transgenici con lesioni cerebrali a intervalli definiti dopo l'infortunio. Il nervo contiene neuroni che esprimono una proteina fluorescente.
Utilizzando la microscopia a fluorescenza, visualizzare il nervo danneggiato, che mostra un progressivo aumento dei gonfiori e delle disconnessioni assonali.
Fissare il tessuto per preservare le strutture cellulari.
Risciacquare il fazzoletto per rimuovere il fissativo in eccesso.
Trattare con una soluzione di osmio-ferrocianuro che si lega ai lipidi della guaina mielinica e migliora il contrasto per l'imaging.
Sciacquare il tessuto, quindi incubare in un composto di metalli pesanti che si lega alle macromolecole e migliora il contrasto.
Disidratare il tessuto utilizzando concentrazioni crescenti di alcol e immergerlo in una resina.
Ottenere sezioni trasversali e longitudinali e trattarle con composti di metalli pesanti, migliorando il contrasto.
Al microscopio elettronico, le sezioni longitudinali rivelano uno sviluppo progressivo di gonfiori assonali con mitocondri rigonfi accumulati, vescicole, blebbing della membrana e strutture citoscheletriche interrotte.
Le sezioni trasversali mostrano una progressiva rottura delle guaine mieliniche, indicando una degenerazione assonale.