JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
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Inizia con una fetta di cervello ricca di neuroni dopaminergici.
Incubare la fetta in un cRC contenente falsi neurotrasmettitori fluorescenti o FFN.
Gli FFN sono marcatori sensibili al pH che imitano la dopamina e emettono fluorescenza più intensamente in ambienti neutri che acidi.
Questi FFN entrano selettivamente nei neuroni dopaminergici e vengono caricati nelle vescicole sinaptiche acide, dove la variazione di pH riduce la fluorescenza FFN.
Trasferire questa fetta in una camera di imaging, fissarla e perfondere continuamente con aCSF per rimuovere gli FFN non legati.
Immagine della fetta per confermare l'accumulo di FFN come punti fluorescenti.
Quindi, posizionare un elettrodo stimolante per erogare la stimolazione elettrica.
Gli impulsi elettrici fanno sì che il calcio entri nel neurone, provocando la fusione delle vescicole sinaptiche con la membrana neuronale e il rilascio di FFN nella fessura sinaptica extracellulare.
Nell'ambiente a pH neutro della fessura sinaptica, la fluorescenza FFN si intensifica.
Immagina di nuovo la fetta per osservare la fluorescenza diffusa nello spazio extracellulare, confermando il rilascio di FFN dalle vescicole sinaptiche.