JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:17 min. • March 4th, 2025
L'eparan solfato, un glicosaminoglicano, è presente nelle placche amiloidi associate alla malattia di Alzheimer.
Per visualizzare l'eparan solfato, iniziare con una sezione di tessuto ippocampale umano malato contenente placche amiloidi.
Fissare la sezione di tessuto utilizzando un fissativo per preservare le strutture cellulari.
Successivamente, trattare il tessuto con un agente bloccante per prevenire il legame degli anticorpi non specifici.
Aggiungere un detergente non ionico per permeabilizzare le membrane cellulari.
Incubare il tessuto con anticorpi primari che hanno come bersaglio specifico l'eparan solfato all'interno delle placche amiloidi.
Lavare via gli anticorpi primari non legati.
Quindi, aggiungere gli anticorpi secondari coniugati con fluorofori, che si legano agli anticorpi primari attaccati all'eparan solfato.
Rimuovere eventuali anticorpi non legati.
Colorare i nuclei con un colorante fluorescente.
Infine, utilizzare un microscopio a fluorescenza per visualizzare l'eparan solfato marcato in fluorescenza all'interno delle placche amiloidi e i nuclei di colore blu nella sezione del tessuto malato.