JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:28 min • March 4th, 2025
Inizia con il liquido cerebrospinale, o CSF, raccolto da individui di varie età.
Centrifugare il campione in pellet di detriti cellulari e raccogliere il surnatante.
Il surnatante contiene proteine coinvolte nella generazione dei neuroni o nella neurogenesi.
Prendi una piastra multipozzetto rivestita con streptavidina. Aggiungere un agente bloccante per impedire l'associazione non specifica.
Aggiungere anticorpi di cattura marcati con biotina selettivi alle specifiche proteine correlate alla neurogenesi.
Incubare con agitazione per legare gli anticorpi alla streptavidina, quindi lavare la piastra.
Aggiungere il campione di liquido cerebrospinale insieme agli anticorpi di rilevamento marcati con rutenio ai pozzetti, quindi incubare con agitazione.
Le proteine specifiche correlate alla neurogenesi si legano per catturare gli anticorpi e interagire contemporaneamente con gli anticorpi di rilevamento.
Lavare accuratamente la piastra e aggiungere un tampone di rilevamento.
Posizionare la piastra in un sistema di imaging.
Il tampone di rilevamento innesca l'emissione di luce dal rutenio.
Una diminuzione dell'intensità della luce nei campioni indica riduzioni legate all'età dei livelli di proteine correlate alla neurogenesi, confermando un declino della neurogenesi.