Studiare le interazioni cellula-cellula nel facilitare la maturazione neuronale

Iniziare con una co-coltura di astrociti e aggregati di cellule staminali neuronali differenzianti in mezzi di differenziazione.

Gli astrociti secernono molecole di segnalazione che migliorano la maturazione e la differenziazione delle cellule staminali in neuroni e astrociti.

Successivamente, aggiungere un fissativo per preservare la struttura cellulare, seguito dal lavaggio.

Aggiungere una soluzione detergente per permeabilizzare le membrane cellulari, quindi lavare.

Introdurre un reagente bloccante per bloccare i siti di legame non specifici.

Aggiungere anticorpi primari che si legano specificamente ai marcatori proteici dei neuroni maturi e degli astrociti. Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.

Quindi, aggiungere anticorpi secondari verdi e rossi marcati con fluorescenza e incubare. Questi anticorpi si legano ai rispettivi anticorpi primari, fornendo una fluorescenza distinta alle cellule.

Introduci un colorante nucleare per colorare i nuclei di blu.

Infine, osservare le cellule utilizzando un microscopio confocale.

All'interno degli aggregati, le cellule fluorescenti verdi indicano i neuroni maturi, mentre le cellule fluorescenti rosse rappresentano gli astrociti. Ciò conferma le interazioni cellula-cellula nel facilitare la maturazione neuronale.