JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
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Prendi un cervello fissato chimicamente da un topo sottoposto a stress cronico.
Lo stress compromette la funzione degli oligodendrociti, interrompendo la guaina mielinica ricca di lipidi che circonda gli assoni neuronali nella corteccia prefrontale mediale, una regione del cervello che regola le emozioni.
Riapplicare il fissativo per preservare l'architettura dei tessuti. Immergere il tessuto in un crioprotettore per sostituire l'acqua, prevenendo la formazione di cristalli di ghiaccio durante il congelamento.
Congelare il cervello, quindi sezionarlo in fette coronali.
Montare le fette sui vetrini, quindi reidratarle in acqua per migliorare la penetrazione delle macchie.
Scaldare le fette in una soluzione contenente ioni d'oro. Questi ioni si legano selettivamente ai lipidi nella guaina mielinica e formano depositi metallici d'oro, etichettando i neuroni mielinizzati.
Riscaldare con un agente riducente per ridurre gli ioni d'oro in eccesso, quindi risciacquare per rimuoverli e disidratare il tessuto utilizzando concentrazioni di alcol crescenti.
Utilizzare lo xilene per aumentare la trasparenza dei tessuti e montare i vetrini.
Utilizzando la microscopia, visualizza i neuroni mielinizzati macchiati d'oro e valuta i cambiamenti indotti dallo stress.