JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:12 min. • August 29th, 2025
Prendi una coltura di Staphylococcus aureus, un batterio con una spessa parete cellulare di peptidoglicano.
Diluire la coltura in terreno fresco contenente antibiotici e incubarla a una temperatura calda agitandola per favorire la crescita batterica.
Trasferire la coltura in una provetta e centrifugarla per pellettare i batteri.
Scartare il surnatante e posizionare il pellet sul ghiaccio per proteggere i batteri dai danni.
Risospendere il pellet nel tampone di lisi e trasferirlo in un tubo contenente perle di silice.
Inserire la provetta in uno strumento meccanico di lisi cellulare e avviare l'agitazione.
Le collisioni rapide tra i batteri e le perle generano forze di taglio. Questo lisa i batteri, rilasciando DNA, RNA e complessi RNA-proteina.
Gli ioni nel tampone di lisi stabilizzano le strutture dell'RNA, mentre gli agenti riducenti nel tampone inattivano gli enzimi che degradano l'RNA.
Ora, centrifugare nuovamente la miscela per pellettare i detriti.
Raccogliere il surnatante contenente acidi nucleici e proteine per ulteriori analisi.
Coltiva una colonia di ceppi che trasportano l'sRNA pCN51 P3 MS2 o i plasmidi pCN51 P3 MS2 in tre millilitri di terreno BHI integrato con 10 microgrammi pe
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