JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:25 min. • August 29th, 2025
Iniziare con ceppi batterici patogeni coltivati su piastre di agar separate.
Ogni ceppo porta mutazioni diverse nei geni responsabili della produzione di una capsula, uno strato protettivo di polisaccaridi.
Trasferire le singole colonie dalle piastre in provette separate contenenti un mezzo liquido ricco di sostanze nutritive e incubarle.
Durante l'incubazione, i batteri entrano nella fase di crescita esponenziale ed esprimono i geni che producono le capsule.
Le mutazioni in questi geni provocano variazioni nella produzione di capsule, generando cellule non incapsulate, debolmente incapsulate e pesantemente incapsulate.
Trasferire le colture e centrifugare per pellettare le cellule.
Le cellule non incapsulate e debolmente incapsulate formano pellet densi, mentre le cellule fortemente incapsulate,
a causa del loro strato capsulale idratato, formano un pellet meno denso.
Rimuovere con cautela il surnatante per evitare di perdere le cellule fortemente incapsulate.
Aggiungere un tampone, centrifugare nuovamente e scartare il surnatante per eliminare il mezzo residuo.
Risospendere le cellule nel tampone per stabilizzare i batteri senza promuovere un'ulteriore crescita, preservando così la struttura della capsula.
Selezionare una singola colonia da una piastra di riserva con un ansa sterile e inoculare 10 millilitri di un brodo appropriato.
Incubare la coltura durante la notte. Quindi trasferire la coltura in una provetta da 15 millilitri e centrifugare. Quindi, scartare il surnatante e risospendere il pellet in due millilitri di PBS.
Ripetere la centrifugazione ed eliminare il surnatante risultante. Quindi risospendere il pellet in due millilitri di PBS.