JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:37 min. • August 29th, 2025
Prendiamo le colonie batteriche trasformate con un plasmide contenente un gene inducibile.
Scegli una singola colonia per inoculare terreni liquidi freschi.
Incubare con agitazione per l'ossigenazione e la crescita batterica omogenea.
Utilizzare un campione di coltura diluito per misurare l'assorbanza e stimare la densità cellulare.
Prelevare una piastra a pozzetti con pareti nere e fondo in vetro per evitare la diafonia della luce tra i campioni, garantendo una quantificazione accurata della luminescenza.
Aggiungere la coltura batterica con la concentrazione cellulare desiderata nei pozzetti.
Aggiungere un antibiotico per mantenere la ritenzione plasmidica.
Aggiungi un induttore per avviare l'espressione genica.
Il gene codifica per un enzima che reagisce con una specifica proteina batterica per produrre luce, conferendo ai batteri proprietà bioluminescenti.
Posizionare un coperchio sulla piastra per evitare l'evaporazione prima di metterla in un lettore di piastre a temperatura controllata con modalità di agitazione costante.
A intervalli regolari, registrare l'assorbanza per misurare il numero di cellule e l'intensità della luce per monitorare la bioluminescenza. Correlare la densità cell
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