Coltura di Mycobacterium tuberculosis in condizioni di restrizione del ferro

Inizia con una piastra di agar contenente colonie di Mycobacterium tuberculosis coltivate su un terreno arricchito di sostanze nutritive.

Inoculare una singola colonia in un brodo integrato con sostanze nutritive e incubare con agitazione per una crescita uniforme.

Consentire alla coltura di raggiungere la fase logaritmica tardiva, in cui le cellule sono metabolicamente attive.

Pipettare un piccolo volume su una piastra di agar arricchita, distribuirla uniformemente e incubare fino a formare uno strato batterico continuo.

Inumidire un tampone sterile con un terreno minimo a basso contenuto di ferro (LIMM) e raccogliere i batteri.

Sospenderli in un contenitore di plastica contenente LIMM per evitare la contaminazione da ferro.

Aggiungere un agente disperdente per evitare la formazione di grumi e incubare senza agitare.

In condizioni limitanti il ferro, i batteri attivano le risposte allo stress e producono siderofori nel citoplasma.

Questi vengono impacchettati in vescicole extracellulari e rilasciati nell'ambiente circostante.

I siderofori catturano il ferro e aiutano i batteri a sopravvivere.

Questo sistema evidenzia l'adattamento micobatterico e la sopravvivenza in condizioni di ferro limi