Isolamento di vescicole extracellulari contenenti siderofori da Mycobacterium tuberculosis

Prendi una coltura di Mycobacterium tuberculosis coltivata in un terreno limitante il ferro per migliorare la secrezione di vescicole extracellulari contenenti siderofori, un chelante del ferro.

Centrifuga per pellettare i batteri.

Raccogli il surnatante e filtralo per rimuovere i batteri residui.

Trasferire il filtrato in un sistema di ultrafiltrazione agitato e filtrare per rimuovere i mezzi in eccesso e concentrare le vescicole extracellulari.

Centrifugare il concentrato per pellettare i detriti cellulari.

Trasferire il surnatante in una provetta da ultracentrifuga e centrifugare per raccogliere il pellet EV.

Scartare il surnatante, risospendere il pellet in un tampone e mescolarlo con un mezzo a gradiente di densità concentrato per formare lo strato inferiore.

Sovrapporre con concentrazioni decrescenti del mezzo gradiente per creare un gradiente di densità discontinuo.

Aggiungere il tampone nella parte superiore e centrifugare. Le EV migrano verso lo strato che corrisponde alla loro densità di galleggiamento.

Raccogli ogni frazione in una provetta separata.

La frazione purificata con vescicole extracellulari contenenti siderofori è pronta per gli studi a valle.

Trasferire la coltura in ci