Isolamento di vescicole extracellulari batteriche mediante cromatografia ad esclusione dimensionale

Eseguire una cromatografia ad esclusione dimensionale o una colonna SEC impacchettata con perle di resina porosa di dimensioni definite. Contiene un serbatoio di campionamento nella parte superiore.

Aggiungere soluzione salina tamponata con fosfato o PBS per equilibrare le perle della colonna ed eliminare il flusso.

Caricare un filtrato di coltura batterica concentrato che contiene vescicole extracellulari o EV, proteine secrete e contaminanti.

Le vescicole extracellulari sono nanovescicole a base lipidica che trasportano molecole bioattive e sono secrete dai batteri.

Una volta che il filtrato entra nelle perline, aggiungere PBS per guidarlo attraverso il letto di resina.

Scartare l'eluato iniziale contenente grandi contaminanti non vescicolari.

Posizionare una provetta di raccolta sotto l'uscita e aggiungere in sequenza il PBS.

Le vescicole extracellulari di grandi dimensioni eludono i pori più piccoli della resina, si muovono attraverso gli spazi interparticellari tra le perle ed eluiscono per prime.

Le proteine e i contaminanti più piccoli entrano nei pori, seguono percorsi più lunghi ed eluiscono in seguito.

Raccogli le frazioni a eluizione precoce contenenti EV e conservale per l'anali