JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:22 min • September 26th, 2025
Inizia con un piatto contenente una coltura di cianobatteri filamentosi posizionato sopra una piccola finestra dotata di un supporto montato su LED in una stanza buia.
Il LED illumina la parabola dal basso, creando una piccola zona di luce.
Durante l'incubazione, i cianobatteri filamentosi migrano verso il centro illuminato, dimostrando la fototassi.
Nel tempo, i cianobatteri migrano e si accumulano al centro illuminato, formando una zona batterica visibilmente densa.
Dopo l'incubazione, posizionare un foglio bianco sotto il piatto per migliorare il contrasto.
Cattura un'immagine dell'area illuminata e analizzala utilizzando il software.
Disegna una linea attraverso il piatto che passa attraverso il centro della zona batterica per generare un profilo di intensità dei pixel.
Confronta l'intensità media dei pixel all'esterno e all'interno della zona batterica.
Quindi, traccia una linea alla massima intensità all'interno della regione centrale per determinare il diametro della zona batterica, che rappresenta la fototassi cianobatterica.
Preparare i supporti LED in cui sono montati i LED da cinque millimetri per irradiare un'area di 20 millimetri quadrati dal basso verso l'alto. Misurare e regolare l'intensità dei LED. Assicurati che l'intero ambiente si trovi in una stanza buia o in un contenitore chiuso e buio.
Mettere otto millilitri del terreno contenente P. lacuna in una capsula di Petri di sei centimetri, chiudere la piastra di Petri con il coperchio e posizionarla su un supporto LED in modo che il LED si trovi al centro della piastra di Petri. Dopo due giorni, in genere, è possibile acquisire un'immagine della capsula di Petri con la fotocamera di uno smartphone puntata direttamente sulla posizione del trattamento con la luce. Usa un supporto e un foglio bianco come sfondo per garantire la stessa distanza e le stesse condizioni di luce per ogni immagine.
Aprire il software ImageJ, fare clic su File, Apri e selezionare il file. Quindi, fai clic su Invio. Seleziona il pulsante dritto e premi il pulsante sinistro del mouse per tracciare una linea da un'estremità della capsula di Petri all'estremità opposta.
Assicurarsi che la linea passi attraverso il centro del cerchio di filamenti. Fare clic su Analizza e misura per vedere la lunghezza della piastra di Petri. Quindi, fare clic su Analizza e traccia profilo nel menu ImageJ.
Stimate un valore medio per l'intensità dei pixel all'esterno del cerchio e un altro valore medio per l'intensità dei pixel all'interno del cerchio. Puntare il mouse sulla posizione Y tra questi valori per stimare i valori X di entrambi i lati del cerchio. Annotare entrambi i valori e calcolare la differenza.
Quindi seleziona il pulsante dritto e disegna una linea al valore medio-massimo dell'intensità dei pixel. Infine, fai clic su Analizza e poi su Misura per ottenere la lunghezza del cerchio della cella interna.
Questo studio analizza il comportamento fototattico dei cianobatteri filamentosi utilizzando un ambiente luminoso controllato. La metodologia prevede la misurazione della migrazione dei cianobatteri verso un'area illuminata, fornendo informazioni sul loro risposta fototattica.
Questo saggio consente la misurazione quantitativa del comportamento fototattico microbico, supportando la validazione degli obiettivi nella ricerca su microorganismi fotosintetici. Fornendo un metodo riproducibile per valutare la migrazione direzionata dalla luce, esso contribuisce a ridurre i rischi meccanicistici nella selezione di ceppi di cianobatteri per applicazioni di bioproduzione. L'approccio offre una previsione affidabile nell'associare modifiche genetiche o ambientali a risposte fenotipiche funzionali nei flussi di lavoro della fase iniziale della scoperta.
Il saggio si inserisce nei flussi di lavoro dalla fase iniziale di scoperta alla fase preclinica, fornendo uno strumento di screening fenotipico per l'ingegneria di microorganismi fotosintetici.
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Ultimo aggiornamento: 29 agosto 2026