Imaging a fluorescenza dell'infezione batterica associata a biomateriale in embrioni di zebrafish

Inizia con embrioni di zebrafish anestetizzati iniettati con batteri patogeni marcati in fluorescenza, da soli o mescolati con microsfere di biomateriali, per modellare l'infezione associata al biomateriale in vivo.

Posizionare una piastra di Petri contenente terreno basale con anestetico sul tavolino di un microscopio a stereofluorescenza dotato di filtri appropriati.

Aggiungere la soluzione di metilcellulosa al piatto per creare un mezzo viscoso che immobilizza gli embrioni per l'imaging.

Trasferisci i singoli embrioni nella metilcellulosa e allineali orizzontalmente, assicurandoti che il sito di iniezione sia visibile.

Utilizzando il filtro a campo chiaro, concentrarsi sul sito di iniezione per individuare la regione infetta.

Imposta i parametri di imaging Z-stack e acquisisci immagini a fluorescenza a diverse profondità per catturare le dinamiche dell'infezione in tre dimensioni.

Utilizzando il software, è possibile analizzare le immagini acquisite nel tempo per quantificare l'intensità della fluorescenza e monitorare la distribuzione batterica.

Questo protocollo consente un confronto diretto della progressione dell'infezione in embrioni vivi con e senza esposizione al biomateriale.

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