JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:30 min. • September 26th, 2025
Prendi una coltura metabolicamente attiva di Mycobacterium marinum. Ciò garantisce un'elevata vitalità batterica e uno stato fisiologico ottimale.
Centrifugare la coltura per pellettare i batteri.
Scartare il surnatante in eccesso e risospendere il pellet in un terreno fresco contenente un agente disperdente.
Trasferire la sospensione in provette per microcentrifuga e sonicare in condizioni controllate.
La sonicazione interrompe gli aggregati batterici e disperde le cellule, dando luogo a una sospensione vitale di una singola cellula.
Raccogliere la sospensione sonicata in una siringa e farla passare attraverso un filtro a membrana per rimuovere eventuali grumi rimanenti, garantendo una popolazione unicellulare uniforme.
Utilizzando uno spettrofotometro, misurare la densità ottica della sospensione batterica.
Diluire la sospensione con un terreno fresco contenente crioprotettore per raggiungere la concentrazione batterica desiderata preservando la vitalità cellulare.
Aliquotare la sospensione finale a cella singola e conservarla a temperature estremamente basse. Il crioprotettore aiuta a mantenere la vitalità batterica durante la conservazione a lungo termine.
Dopo l'inoculazione secondo il
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