JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:48 min. • September 26th, 2025
Prendi una cuvetta contenente una soluzione di lavoro di tioflavina T, un colorante fluorescente specifico per l'amiloide, disciolto in soluzione salina tamponata con fosfato.
Posizionare la cuvetta in uno spettrofluorimetro e registrare il segnale di fluorescenza di base.
Mettere in pausa la scansione e rimuovere la cuvetta.
Aggiungere il surnatante di coltura sterilizzato con filtro raccolto da cellule endoteliali polmonari infettate da batteri virulenti Pseudomonas .
Il surnatante contiene aggregati amiloidi, che sono proteine mal ripiegate e ricche di fogli beta.
Mescolare delicatamente il contenuto per inversione per garantire una distribuzione uniforme.
Ricaricare la cuvetta nello spettrofluorimetro e riprendere la scansione per acquisire un segnale di fluorescenza basato sul tempo.
La tioflavina T si lega specificamente alle amiloidi ricche di fogli beta, il che porta a una maggiore fluorescenza.
Eseguire una scansione a fluorescenza utilizzando le stesse impostazioni.
Un aumento della fluorescenza rispetto al basale indica la presenza e l'abbondanza relativa di amiloidi indotte dall'infezione nel surnatante della coltura.
Per quantificare gli amiloidi all'interno del surnatante, aggi
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