JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:27 min. • September 26th, 2025
Iniziare con una coltura di Pseudomonas aeruginosa ricombinante in un terreno di selezione antibiotico.
Questi batteri ospitano un plasmide non replicativo integrato nel genoma vicino al gene bersaglio batterico destinato alla delezione.
L'integrazione è avvenuta tramite sequenze omologhe condivise tra il plasmide e il genoma, risultando in una singola ricombinazione crossover.
Il plasmide codifica per un gene di resistenza agli antibiotici e per il gene sacB , che conferisce sensibilità al saccarosio.
Strisciare i batteri su un terreno contenente saccarosio ma privo dell'antibiotico e incubare.
Senza pressione antibiotica, si verifica una seconda ricombinazione, o un doppio crossover, tra regioni omologhe, asportando il plasmide e il gene bersaglio.
Durante la moltiplicazione batterica, il plasmide asportato non viene trasmesso, rendendo i batteri tolleranti al saccarosio.
Applicare i batteri su un terreno non selettivo e su un terreno contenente saccarosio o l'antibiotico e incubare.
La crescita sul terreno non selettivo e sul saccarosio, ma non sul terreno antibiotico, conferma il successo di un doppio crossover.
Inizia coltivando singole colonie ricombinanti incrociate in brodo di isola
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici