Preparazione e isolamento di spore di Streptomyces venezuelae da una coltura liquida

Inizia con una fiaschetta contenente una molla e riempita con un mezzo ricco di sostanze nutritive che supporta l'intero ciclo di vita dei batteri Streptomyces venezuelae.

Inoculare le spore batteriche nel terreno e incubare agitando per garantire una corretta aerazione e distribuzione dei nutrienti.

La molla migliora la miscelazione, favorendo una crescita uniforme e costante.

Le spore assorbono i nutrienti e germinano, producendo tubi germinali che si estendono sulle loro punte, si ramificano in ife e si sviluppano in una struttura miceliale.

Quando i nutrienti diventano limitati, l'organismo produce speciali ife sporogene che si dividono e producono spore, cellule riproduttive dormienti.

Osservare al microscopio a contrasto di fase per confermare la presenza di frammenti miceliali e spore.

Centrifugare la coltura per pellettare i detriti miceliali più pesanti, lasciando spore più leggere nel surnatante.

Trasferire il surnatante in una microprovetta e metterlo sul ghiaccio per evitare una germinazione prematura.

Diluire la sospensione di spore in terreno fresco e conservarla al freddo fino a nuovo utilizzo.

Inoculare 30 millilitri di terreno di coltura integrato con 10 microlitri di spore del ceppo S.venezuela da visualizzare. Per una crescita e una sporulazione costanti delle cellule, utilizzare un pallone deflettore o un pallone che contenga una molla per consentire un'aerazione sufficiente.

Coltivare le cellule per 35-40 ore a 30 gradi Celsius e 250 giri/min. Quando sei pronto, dovresti essere in grado di vedere i frammenti miceliali e le spore tramite microscopia a contrasto di fase montata su liquido. Centrifugare un millilitro di coltura in una centrifuga da tavolo a 400 volte G per un minuto per pellettare il micelio e i frammenti cellulari più grandi.

Quindi trasferire circa 300 microlitri del surnatante contenente una sospensione di spore, in un nuovo tubo da 1,5 millimetri e posizionare il tubo sul ghiaccio.