Imaging time-lapse a fluorescenza del ciclo di vita di Streptomyces venezuelae

Prendi una piastra microfluidica con un pozzetto contenente spore di Streptomyces venezuelae, un batterio che forma ife.

Altri pozzetti designati contengono un terreno ricco di sostanze nutritive o esaurito.

Le spore derivano da un ceppo che esprime le proteine fluorescenti DivIVA e FtsZ, che si localizzano rispettivamente sulle punte ifali e sulle pareti trasversali.

Applicare l'olio da immersione sulla lente dell'obiettivo di un microscopio invertito e sulla finestra di imaging della lastra.

Montare la piastra sul tavolino del microscopio e iniziare l'imaging time-lapse.

Caricare le spore nella camera di coltura della piastra.

Quindi, introduci il terreno ricco di sostanze nutritive per avviare la germinazione delle spore.

Man mano che le ife crescono, DivIVA si accumula alle punte ifali, mentre FtsZ forma anelli sparsi alle pareti trasversali.

Quindi, passa al mezzo speso. La mancanza di nutrienti in questo mezzo favorisce la sporulazione.

Nelle ife germogliate, i focolai di DivIVA scompaiono e FtsZ si riorganizza in una scala regolare di anelli di divisione, formando setti di sporulazione.

Nel tempo, la scomparsa della fluorescenza FtsZ nelle stesse ife conferma il completamento della sp