JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
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Inizia con una pianta sperimentale con regioni fogliari geneticamente modificate che esprimono grandi frammenti non fluorescenti di proteina fluorescente verde superfolder o sfGFP.
Iniettare queste aree modificate con batteri Pseudomonas contenenti proteine effettrici marcate con il piccolo frammento non fluorescente di sfGFP.
Incubare per consentire l'interazione tra i batteri e le cellule fogliari.
Utilizzando un sistema di secrezione specializzato, Pseudomonas rilascia le proteine effettrici marcate nel citosol della foglia.
La vicinanza tra i frammenti di GFP grandi e piccoli consente il loro assemblaggio in sfGFP fluorescente funzionale, che poi trasloca sulla membrana plasmatica.
Dopo l'incubazione, asportare i dischi fogliari dalle aree iniettate.
Visualizza questi dischi utilizzando un microscopio confocale a scansione laser.
Inizialmente, visualizzare il disco fogliare a bassa intensità laser per ridurre al minimo l'autofluorescenza. Quindi, aumentare la potenza del laser per migliorare la visibilità.
La fluorescenza verde conferma l'avvenuta somministrazione di infezioni batteriche e proteine effettrici nelle cellule vegetali.
Per le foglie di Nicotiana benthamiana , infiltrare la
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