Quantificazione dell'alginato batterico utilizzando un test di immunoassorbimento enzimatico basato su anticorpi

Prelevare una micropiastra con un campione contenente alginato, un esopolisaccaride protettivo prodotto dal batterio Pseudomonas aeruginosa.

Preparare una diluizione seriale di uno standard derivato dall'alginato per quantificare la concentrazione di alginato del campione.

Aggiungere un tampone di rivestimento e incubare per facilitare l'adesione delle molecole alla superficie del pozzetto.

Lavare per rimuovere le molecole non legate.

Incubare con un agente bloccante per mascherare siti di legame non specifici.

Lavare, quindi incubare con anticorpi primari specifici per l'alginato.

Lavare di nuovo, quindi incubare con anticorpi secondari coniugati con enzimi che hanno come bersaglio gli anticorpi primari.

Lavare e poi incubare con un substrato cromogenico, che l'enzima ossida per produrre un prodotto colorato.

Aggiungere una soluzione acida che arresti la reazione e migliori il colore per consentire il rilevamento colorimetrico.

Utilizzando un lettore di micropiastre, misurare l'intensità del colore.

Creare una curva standard dalle intensità delle diluizioni standard e tracciare l'intensità del campione per determinare la concentrazione di alginato.

Utilizzando una micropipetta, aggiungere 50