Seedling Flood Assay per lo screening della resistenza batterica nei pomodori

Per verificare la resistenza batterica in diversi ceppi di pomodoro, inizia con piantine di pomodoro di 10 giorni coltivate in condizioni sterili.

Queste piantine mostrano foglie vere emergenti e radici consolidate.

Inondare entrambi i ceppi con batteri patogeni mescolati con un tensioattivo per facilitare la diffusione uniforme dell'inoculo sulla superficie della pianta. Inclinare e agitare la piastra per massimizzare il contatto della piantina con l'inoculo.

Rimuovere l'inoculo in eccesso, richiudere le piastre e incubarle in una camera di crescita.

I batteri entrano attraverso gli stomi e colonizzano l'apoplasto, lo spazio extracellulare tra le cellule fogliari.

I batteri iniettano proteine effettrici nelle cellule vegetali per sopprimere le risposte immunitarie delle piante.

I ceppi suscettibili non riescono a rilevare questi effettori, consentendo la proliferazione batterica e il danno ai tessuti vegetali indotto dalle tossine batteriche.

I ceppi resistenti riconoscono gli effettori e producono specie reattive dell'ossigeno per uccidere i batteri.

Dopo l'incubazione, i ceppi resistenti mostrano una crescita sostenuta, mentre i ceppi sensibili mostrano uno sviluppo arrestato.

Trasferire le piastre con le piantine di dieci giorni dalla camera di crescita alla cabina di biosicurezza e rimuovere il nastro chirurgico. Quindi trasferire sei millilitri di inoculo su ogni piastra.

Spingi delicatamente le piantine nell'inoculo con la punta di una pipetta e avvia un timer per tre minuti. Tieni un piatto in ogni mano e inclina la parte anteriore del piatto verso il basso per immergere i cotiledoni e le foglie delle piantine. Agitare l'inoculo da un lato all'altro da cinque a sette volte, quindi inclinare le piastre all'indietro per coprire le radici con l'inoculo.

Inclinare nuovamente le piastre verso il basso e ripetere il ciclo per un totale di tre minuti. Versare l'inoculo dalle piastre, adagiarle su una superficie piana e versare l'inoculo residuo per la seconda volta. Riavvolgere le piastre e rimetterle nella camera di crescita.