Consegna localizzata di batteri nel lume intestinale di una larva di pesce zebra mediante microiniezione

Prendi un piatto contenente una larva di pesce zebra anestetizzata.

Applicare una goccia di agarosio a basso punto di fusione sulla larva e posizionarla delicatamente lateralmente per consentire l'accesso intestinale durante l'iniezione.

Ora, raffreddare brevemente l'agarosio per solidificarlo, immobilizzando così la larva.

Aggiungere terreni contenenti un agente anestetico per mantenere la larva sotto anestesia.

Successivamente, prendi una sospensione di Clostridioides difficile marcato in modo fluorescente, un batterio patogeno, e aggiungi un colorante tracciante per facilitare il monitoraggio dell'iniezione.

Caricare questa miscela in un ago per microiniezione e montare l'ago su un micromanipolatore.

Sotto uno stereomicroscopio, posizionare l'ago con un angolo diretto verso l'intestino larvale.

Quindi, inserire delicatamente la punta dell'ago nel lume intestinale.

Iniettare i batteri direttamente nel lume e confermare l'avvenuta erogazione utilizzando il colorante tracciante. Quindi, ritrarre l'ago.

Utilizzando la microscopia a fluorescenza, confermare la localizzazione di Clostridioides difficile nell'intestino larvale.

Per prima cosa, metti una goccia di agarosio a basso punto di fusion