Isolamento e coltura di batteri Clostridioides difficile dall'intestino larvale di pesce zebra

Inizia con una larva di pesce zebra soppressa con un intestino infettato da Clostridioides difficile, un batterio anaerobio patogeno.

Fissare il tronco dorsale superiore della larva e rimuovere la testa per esporre gli organi interni.

Fissare il tronco medio-dorsale e isolare delicatamente l'intestino dalla cavità corporea.

Trasferire l'intestino isolato in una provetta da microcentrifuga contenente tampone.

Omogeneizzare l'intestino usando un pestello per distruggere il tessuto e rilasciare i microbi intestinali.

Trasferire l'omogenato in una provetta contenente mezzi di allevamento selettivi integrati con antibiotici.

Incubare l'omogenato in una camera anaerobica.

Le condizioni anaerobiche inibiscono la crescita dei batteri aerobici, mentre gli antibiotici mirano e sopprimono specificamente la crescita dei microbi intestinali anaerobi nativi.

Il Clostridioides difficile resiste a questi antibiotici e prolifera in condizioni anaerobiche.

I nutrienti e i fattori di crescita nei mezzi di allevamento promuovono ulteriormente la divisione cellulare, consentendo la crescita di Clostridioides difficile vitale.

Dopo l'eutanasia delle larve di pesce zebra infette, inserire un ago nel tronco dorsale