JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:45 min. • September 26th, 2025
Prendiamo i chip microfluidici con camere di crescita e di farmaco separate da una valvola micromeccanica.
Caricare ceppi mutanti di E. coli wild-type e resistenti al TMP, sospesi in terreni, nelle camere di crescita utilizzando la pressione, dove il trimetoprim (TMP) è l'antibiotico testato.
Quindi, caricare le camere dei farmaci con terreni contenenti una bassa concentrazione di TMP per indurre lo stress cellulare nei batteri.
Azionare la valvola micromeccanica per consentire la diffusione del TMP nelle camere di crescita, consentendo l'ingresso del TMP nei batteri.
Posizionare i chip all'interno dell'incubatore montato sul tavolino del microscopio invertito e avviare l'imaging time-lapse.
Nell'E. coli wild-type, il TMP si lega all'enzima diidrofolato reduttasi, impedendo il legame del diidrofolato e causando filamentazione indotta da stress e ridotta moltiplicazione batterica.
Tuttavia, l'alterata struttura DHFR del ceppo mutante impedisce il legame con il TMP, consentendo la normale moltiplicazione.
Osservare le immagini time-lapse.
L'E. coli wild-type mostra filamentazione e ridotta moltiplicazione durante il trattamento con TMP, mentre il ceppo mutante mostra morfologia e moltiplicaz
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