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Microbiologia
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Inizia con una coltura liquida di Sporosarcina pasteurii in un terreno ricco di sostanze nutritive.
Prelevare una soluzione madre di arricchimento contenente urea, cloruro di calcio, cloruro di ammonio e bicarbonato di sodio.
Aggiungere una parte del terreno di arricchimento alla provetta di coltura batterica.
Agitare i tubi per mescolare uniformemente le cellule batteriche e i nutrienti.
Incubare le colture arricchite in un'incubatrice non agitante.
La Sporosarcina pasteurii, un batterio del suolo Gram-positivo, produce l'enzima ureasi in presenza di urea.
L'ureasi scompone l'urea in ioni ammonio e carbonato.
Il cloruro di ammonio e il bicarbonato di sodio aiutano a mantenere un pH alcalino che favorisce la precipitazione minerale.
Gli ioni carbonato reagiscono con gli ioni calcio del cloruro di calcio per formare carbonato di calcio insolubile.
Questo precipitato inizia a formarsi attorno alle cellule batteriche e cristallizza in calcite, una forma cristallina stabile.
Questi cristalli si depositano come depositi bianchi sul fondo del tubo, dimostrando la precipitazione di calcite microbiologicamente indotta, o MICP.
Trasferire nove millilitri della coltura liquida preparata in diverse provette da centrifuga sterilizzate da dieci millilitri. Preparare 100 millilitri della soluzione madre di arricchimento esterno utilizzando una bilancia analitica per misurare attentamente due grammi per litro di urea, un grammo per litro di cloruro di ammonio, 212 milligrammi per litro di bicarbonato di sodio e 280 milligrammi per litro di cloruro di calcio.
In un becher con terreno fresco, unire tutti gli ingredienti tranne l'urea e l'autoclave. Dopo la sterilizzazione in autoclave, mescolare l'urea con un millilitro di terreno fresco e passare la soluzione attraverso una siringa dotata di un filtro da 0,2 micrometri prima di aggiungerla al terreno di arricchimento. Aggiungere un millilitro del terreno di arricchimento con additivi alle provette da centrifuga sterilizzate contenenti nove millilitri della coltura preparata.
Agitare ogni provetta e incubare in un'incubatrice non agitante a 30 gradi Celsius. Monitorare regolarmente tutte le unità per l'inizio delle precipitazioni.