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Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:49 min • September 26th, 2025
Posizionare un vetrino per microarray sterilizzato e rivestito di agarosio con più punti polimerici in una piastra multipozzetto. L'agarosio riduce al minimo il legame batterico aspecifico.
Aggiungere una coltura batterica mista al vetrino e incubarlo con una leggera agitazione.
I batteri secernono proteine di adesione distinte che si legano a macchie polimeriche favorevoli, con conseguente maggiore attaccamento e colonizzazione batterica nel tempo.
Al contrario, i polimeri repellenti resistono all'adsorbimento delle proteine e riducono l'attaccamento batterico.
Sciacquare il vetrino con soluzione fisiologica tamponata con fosfato o PBS per rimuovere i batteri legati in modo lasco.
Aggiungere DAPI per colorare il DNA dei batteri attaccati alla superficie.
Lavare il vetrino con PBS, asciugarlo e sigillarlo con un vetrino coprioggetti adesivo.
Sterilizzare la superficie esterna del vetrino con etanolo.
Cattura immagini in campo chiaro per individuare le macchie polimeriche. Quindi, passare alla modalità di fluorescenza per rilevare la fluorescenza sulle macchie polimeriche.
Le macchie polimeriche che mostrano una fluorescenza ridotta indicano un attacco batterico minimo e sono identificate come polimeri repellenti ai batteri.
Dopo aver coltivato e preparato gli inoculi per i microarray, secondo il protocollo di testo, posizionare i microarray polimerici sterilizzati UV in piastre rettangolari a quattro pozzetti e aggiungere sei millilitri di colture batteriche miste. Incubare le piastre a 37 gradi Celsius con una leggera agitazione per cinque giorni. Dopo l'incubazione, utilizzare PBS per sciacquare delicatamente i microarray due volte.
Quindi aggiungere un microgrammo per millilitro di DAPI in PBS e incubare per 30 minuti. Quindi, trasferire i microarray su una nuova piastra a quattro pozzetti, coprire i microarray con PBS e agitare delicatamente. Quindi cambiare il PBS una volta e ripetere il lavaggio.
Dopo il risciacquo, asciugare i microarray sotto un flusso d'aria, quindi applicare la pellicola sigillante e applicare i vetrini di copertura sui vetrini dei microarray. Quando la colla è asciutta, utilizzare etanolo al 70% per sterilizzare la superficie esterna. Utilizzando un microscopio a fluorescenza, dotato di un soggettivo 20x, è possibile acquisire singole immagini per ogni punto polimerico in campo chiaro e nei canali DAPI.
Questo studio descrive un metodo per valutare l'adesione batterica a microarray polimerici mediante microscopia a fluorescenza. L'approccio prevede l'incubazione di colture batteriche miste su vetrini rivestiti con agarosio, al fine di valutare l'efficacia di diverse macchie polimeriche nel promuovere o resistere alla colonizzazione batterica.
Questo metodo di screening ad alto rendimento mediante microarray consente l'identificazione rapida di polimeri respingenti i batteri, rispondendo a un'esigenza fondamentale nello sviluppo di dispositivi medici per ridurre il rischio di infezioni. Quantificando l'adesione batterica mediante l'intensità di fluorescenza, l'approccio fornisce dati predittivi per la selezione dei materiali già nelle fasi iniziali del processo di scoperta. Ciò favorisce la riduzione dei rischi associati ai candidati biomateriali e orienta la successiva valutazione preclinica.
Il metodo si inserisce nella fase di scoperta, in cui i candidati materiali vengono valutati per le loro proprietà funzionali prima dell'ottimizzazione del capostipite e dei test preclinici.
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Ultimo aggiornamento: 29 agosto 2026