Identificazione ad alto rendimento di polimeri repellenti ai batteri tramite screening di microarray

0 visualizzazioni2:49 min • September 26th, 2025

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Posizionare un vetrino per microarray sterilizzato e rivestito di agarosio con più punti polimerici in una piastra multipozzetto. L'agarosio riduce al minimo il legame batterico aspecifico.

Aggiungere una coltura batterica mista al vetrino e incubarlo con una leggera agitazione.

I batteri secernono proteine di adesione distinte che si legano a macchie polimeriche favorevoli, con conseguente maggiore attaccamento e colonizzazione batterica nel tempo.

Al contrario, i polimeri repellenti resistono all'adsorbimento delle proteine e riducono l'attaccamento batterico.

Sciacquare il vetrino con soluzione fisiologica tamponata con fosfato o PBS per rimuovere i batteri legati in modo lasco.

Aggiungere DAPI per colorare il DNA dei batteri attaccati alla superficie.

Lavare il vetrino con PBS, asciugarlo e sigillarlo con un vetrino coprioggetti adesivo.

Sterilizzare la superficie esterna del vetrino con etanolo.

Cattura immagini in campo chiaro per individuare le macchie polimeriche. Quindi, passare alla modalità di fluorescenza per rilevare la fluorescenza sulle macchie polimeriche.

Le macchie polimeriche che mostrano una fluorescenza ridotta indicano un attacco batterico minimo e sono identificate come polimeri repellenti ai batteri.

Dopo aver coltivato e preparato gli inoculi per i microarray, secondo il protocollo di testo, posizionare i microarray polimerici sterilizzati UV in piastre rettangolari a quattro pozzetti e aggiungere sei millilitri di colture batteriche miste. Incubare le piastre a 37 gradi Celsius con una leggera agitazione per cinque giorni. Dopo l'incubazione, utilizzare PBS per sciacquare delicatamente i microarray due volte.

Quindi aggiungere un microgrammo per millilitro di DAPI in PBS e incubare per 30 minuti. Quindi, trasferire i microarray su una nuova piastra a quattro pozzetti, coprire i microarray con PBS e agitare delicatamente. Quindi cambiare il PBS una volta e ripetere il lavaggio.

Dopo il risciacquo, asciugare i microarray sotto un flusso d'aria, quindi applicare la pellicola sigillante e applicare i vetrini di copertura sui vetrini dei microarray. Quando la colla è asciutta, utilizzare etanolo al 70% per sterilizzare la superficie esterna. Utilizzando un microscopio a fluorescenza, dotato di un soggettivo 20x, è possibile acquisire singole immagini per ogni punto polimerico in campo chiaro e nei canali DAPI.

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Ultimo aggiornamento: 1 agosto 2026