Preparazione dell'inoculo di Escherichia coli enteroemorragico bioluminescente

Inizia con una scorta congelata di Escherichia coli enteroemorragico o EHEC, un batterio intestinale patogeno.

Questi batteri trasportano un plasmide che esprime la luciferasi per l'imaging bioluminescente in tempo reale e un gene di resistenza agli antibiotici per la selezione.

Strisciare i batteri su una piastra di agar contenente l'antibiotico appropriato e incubare per isolare le singole colonie portatrici di plasmidi.

Scegli una singola colonia e coltivala in un brodo integrato con antibiotici. Incubare per propagare una popolazione geneticamente uniforme e stabile ai plasmidi.

Espandere la coltura in condizioni aerate per sincronizzare le cellule nella crescita logaritmica.

Monitorare la crescita batterica fino al raggiungimento della densità ottica desiderata.

Quindi, centrifugare la coltura per pellettare i batteri.

Rimuovere il surnatante e lavare il pellet con soluzione fisiologica sterile.

Centrifugare di nuovo. Scartare il surnatante e risospendere il pellet in un volume minore di soluzione fisiologica.

Questa sospensione concentrata EHEC è ora pronta per l'inseguimento basato sulla bioluminescenza.

Per iniziare, eseguire una serie negativa di 80 gradi Celsius di batteri E.coli O