Isolamento di batteri resistenti agli antibiotici da un campione d'acqua per l'analisi molecolare

Inizia con un campione d'acqua che contiene batteri presenti nell'acqua e filtralo per rimuovere i detriti.

Trasferire il filtrato diluito su piastre di agar a basso contenuto di nutrienti, ciascuna integrata con un antibiotico specifico. Stendere il filtrato e incubare.

I batteri portatori di uno specifico gene di resistenza agli antibiotici crescono sulle piastre antibiotiche corrispondenti e formano colonie.

Conta le colonie per determinare le unità formanti colonie (CFU), che rappresentano il numero di batteri resistenti agli antibiotici.

Selezionare una singola colonia da ogni piastra e sospenderla in acqua distillata sterile.

Riscaldare la sospensione per lisare le cellule e rilasciare il contenuto intracellulare, incluso il DNA batterico che contiene il gene della resistenza agli antibiotici.

Centrifugare le provette per separare i detriti e raccogliere il surnatante contenente DNA.

Aggiungere reagenti di amplificazione al DNA estratto.

Posizionare le provette in un termociclatore ed eseguire il programma per amplificare una regione specifica del DNA batterico.

Il DNA amplificato è pronto per l'analisi in sequenza per identificare il gene della resistenza agli antibiotici.

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