JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:13 min. • September 26th, 2025
Prendiamo una coltura di Bacillus megaterium, un batterio gram-positivo.
Diluire la coltura in terreno fresco e incubarla agitandola per favorire la divisione batterica.
Trasferire la coltura in una provetta e centrifugare per pellettare i batteri.
Rimuovere il surnatante e risospendere il pellet in un terreno contenente stabilizzanti osmotici per prevenire la lisi dei protoplasti.
Trasferire la soluzione risospesa in un pallone, aggiungere il lisozima e incubare agitando.
Durante l'incubazione, il lisozima degrada la spessa parete cellulare del peptidoglicano dei batteri.
Man mano che la parete cellulare si degrada, i batteri passano da una forma a forma di bastoncino a corpi sferici delimitati solo dalla membrana plasmatica, formando protoplasti.
Visualizzare la sospensione al microscopio.
I batteri di forma rotonda confermano la formazione di protoplasti, mentre i batteri gonfi a forma di bastoncino indicano una digestione incompleta.
Trasferire la soluzione in una provetta e centrifugare per pellettare i protoplasti.
Rimuovere il surnatante e risospendere i protoplasti in terreni freschi contenenti stabilizzatori osmotici per ulteriori analisi.
Per preparare protoplasti Gram-positivi di B
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