Preparazione e induzione di colture di Borrelia burgdorferi per la produzione di particelle virali

Inizia con una coltura di un ceppo geneticamente modificato di Borrelia burgdorferi, un batterio patogeno.

Questo ceppo trasporta DNA batteriofago dormiente integrato nel suo genoma, che è stato ingegnerizzato per includere un gene bersaglio che conferisce resistenza agli antibiotici.

Aggiungere l'antibiotico corrispondente e incubare la coltura. Il gene della resistenza agli antibiotici esprime una proteina che inibisce l'antibiotico, assicurando che solo i batteri che ospitano il gene proliferino.

Una volta che la coltura raggiunge la densità desiderata, centrifugare le cellule per pellettizzarle e scartare il surnatante.

Risospendere il pellet, introdurre un induttore chimico e incubare per indurre danni al DNA.

La risposta di riparazione del DNA risultante asporta il DNA del batteriofago, avviando la sua replicazione, l'espressione delle proteine strutturali e l'assemblaggio di nuovi virioni portatori del gene della resistenza agli antibiotici.

Centrifugare nuovamente la coltura, scartare il surnatante e risospendere le cellule in un terreno fresco.

Le cellule batteriche contenenti virioni maturi sono pronte per ulteriori applicazioni a valle.

Inoculare 150 microlitri del clone appropr