JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 4:20 min. • September 26th, 2025
Iniziare con una piastra a più pozzetti contenente terreni di crescita pre-inoculati con batteri produttori di cellulosa.
Nel pozzetto trattato, il terreno è integrato con acido 2-cloroetilfosfonico (CEPA).
Sigillare la piastra per evitare lo scambio di gas e incubare.
Durante l'incubazione, il CEPA si idrolizza e rilascia etilene, una molecola gassosa.
L'etilene attiva la cellulosa sintasi batterica, che utilizza il glucosio UDP citosolico per sintetizzare la cellulosa.
Nel tempo, i batteri estrudono la cellulosa attraverso la loro membrana.
Questo favorisce l'autoassemblaggio batterico all'interfaccia aria-liquido, formando un biofilm galleggiante a base di cellulosa, o pellicola.
Dopo l'incubazione, trasferire le pellicole in una piastra multipozzetto fresca. Aggiungere una soluzione alcalina e incubare a una temperatura più alta per lisare le cellule.
Rimuovere la soluzione alcalina. Lavare ripetutamente con agitazione per rimuovere i detriti cellulari trattenendo la cellulosa.
Asciugare e pesare le pellicole. Un peso secco più elevato nei campioni trattati con CEPA rispetto al controllo indica una maggiore produzione di cellulosa batterica in risposta all'etilene.
Il test della pellicol
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