JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:41 min. • September 26th, 2025
Inizia con un pellet batterico. I batteri contengono un gene che codifica per una proteina iniziatrice, ma mancano di un gene di resistenza agli antibiotici.
Risospendere il pellet in acqua refrigerata per ridurre al minimo la degradazione cellulare.
Prendiamo un plasmide che trasporta un gene di resistenza agli antibiotici e un gene bersaglio. Questo plasmide è chiamato plasmide suicida perché non può replicarsi senza la proteina iniziatrice.
Aggiungere il plasmide alla sospensione batterica.
Trasferire la sospensione in una cuvetta refrigerata.
Avviare l'elettroporazione applicando un impulso ad alta tensione che interrompe transitoriamente la membrana batterica, consentendo l'ingresso del plasmide.
Aggiungere i terreni di recupero e trasferire la miscela in una provetta di coltura.
Incubare agitandosi.
Prendi una piastra di agar contenente l'antibiotico e prepara la coltura.
La proteina iniziatrice batterica si lega all'origine della replicazione, consentendo al plasmide di replicarsi ed esprimere una proteina di resistenza agli antibiotici.
Ciò consente ai batteri con il plasmide di sopravvivere e crescere, facilitando l'amplificazione del plasmide.
Pellettare la coltura batterica mediant
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