Assorbimento del DNA indotto dalla competenza nello Staphylococcus aureus
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:13 min. • September 26th, 2025
Prendi una coltura di S. aureus sensibile all'antibiotico cloramfenicolo.
Centrifugare per pellettare i batteri e rimuovere il surnatante.
Trasferire il pellet in una provetta contenente mezzi di limitazione dei nutrienti e incubare. Lo stress nutrizionale migliora la competenza, la capacità del batterio di internalizzare il DNA estraneo.
Centrifugare nuovamente e rimuovere il surnatante. Risospendere il pellet in un terreno fresco che limita i nutrienti.
Successivamente, aggiungi il DNA estratto da un ceppo di S. aureus che trasporta un gene resistente al cloramfenicolo. Incubare.
Il macchinario di assorbimento del DNA elabora il DNA in un singolo filamento e lo trasloca nel citoplasma, dove si integra nel cromosoma batterico.
Centrifugare e rimuovere il surnatante. Risospendere il pellet in un mezzo ricco di sostanze nutritive.
Trasferire la sospensione in agar fuso ricco di sostanze nutritive contenente cloramfenicolo.
Versare il composto in un piatto e incubare.
La crescita di colonie resistenti al cloramfenicolo indica un assorbimento riuscito del DNA.
Coltivare la cellula ricevente durante la notte, in cinque millilitri di TSB a 37 gradi Celsius con agitazione. La mattina seguente, tra
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