Un test a base liquida multipozzetto per lo screening di abbattimenti di C. elegans

Prelevare una piastra multipozzetto contenente terreno di coltura agar pre-spottato con batteri RNAi, con o senza un inserto specifico per il gene che ha come bersaglio un gene di C. elegans .

Il seme ha sincronizzato i vermi dello stadio L1 nei pozzetti e li ha incubati per consentire l'alimentazione dei batteri RNAi.

L'inserto produce RNA interferente che prende di mira specifici geni del verme, generando un fenotipo di knockdown specifico del gene.

Aggiungere un tampone ai pozzetti e risospendere delicatamente i vermi.

Trasferire la sospensione in una piastra a pozzetti profondi e lasciare che i vermi si depositino per gravità.

Rimuovere il surnatante, conservando un po' di tampone.

Lavare i vermi con il tampone, quindi scartare il surnatante, lasciando una piccola quantità di tampone.

Quindi, prelevare una piastra di analisi a più pozzetti contenente batteri patogeni.

Erogare un numero definito di vermi di controllo e knockdown nei rispettivi pozzetti per consentire le interazioni ospite-patogeno. I batteri patogeni secernono composti che inducono la mortalità dei vermi.

Confrontare la mortalità dei vermi per valutare l'effetto del knockdown gene-specifico sulla sopravvivenza dei vermi.