Valutazione della mortalità indotta da batteri patogeni nelle larve di C. elegans

Inizia con un batterio patogeno coltivato su agar.

Raschiare i batteri, sospenderli in un tampone e aggiungere un mezzo per mantenere la vitalità batterica.

Erogare la sospensione in una micropiastra.

Successivamente, prendi ceppi separati di larve di C. elegans , con una maggiore suscettibilità agli agenti patogeni o con una maggiore resistenza, e lasciali depositare.

Rimuovere il surnatante, risospendere le larve in un terreno fresco e trasferirle nella micropiastra contenente i batteri.

Sigillare la micropiastra con una membrana permeabile ai gas e incubare. I batteri secernono metaboliti tossici che attivano le vie dello stress e portano alla morte cellulare.

Lavare i pozzetti per eliminare i batteri, aggiungere un colorante fluorescente insensibile alle cellule e incubare.

Il colorante penetra solo nelle cellule larvali morte con membrane interrotte e si lega ai loro acidi nucleici.

Lavare per rimuovere il colorante in eccesso e visualizzare i vermi colorati in modo fluorescente per valutare la mortalità nei ceppi suscettibili e resistenti.

Per eseguire un saggio di uccisione dei liquidi, utilizzare un raschietto cellulare per rimuovere la P. aeruginosa da una piastra SK e risospendere