Coltura e mantenimento di batteri che esprimono RNAi

Inizia con una piastra contenente batteri che esprimono interferenza di RNA o RNAi pre-cresciuti.

Questi batteri trasportano plasmidi contenenti un gene di resistenza agli antibiotici e un inserto genico bersaglio che produce RNA a doppio filamento o dsRNA per inibire l'espressione genica specifica nell'ospite.

Utilizzando uno spillo sterile, trasferire le colonie in una piastra a pozzetti profondi contenente un terreno integrato con antibiotici.

Incubare la piastra con agitazione per una crescita batterica uniforme, dove i pozzetti profondi forniscono l'aerazione.

L'antibiotico elimina i batteri privi del plasmide, assicurando che sopravvivano solo i batteri portatori di plasmidi.

Centrifugare la piastra per separare i batteri ed eliminare il surnatante.

Risospendere i batteri in una soluzione salina tamponata per stabilizzarli.

Erogare i batteri risospesi in una piastra a più pozzetti contenente un terreno ricco di sostanze nutritive integrato con un antibiotico e un induttore.

L'antibiotico seleziona i batteri portatori di plasmidi, mentre l'induttore innesca l'espressione del dsRNA.

La piastra seminata con batteri che esprimono RNAi è pronta per ulteriori saggi.

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