JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:50 min. • September 26th, 2025
Inizia con una coltura di una specie batterica che codifica proteine ricombinanti marcate con il peptide nucleante della vescicola, o VNp, un peptide corto che promuove la formazione di vescicole.
Aggiungi un induttore alla coltura e incuba. L'induttore innesca l'espressione proteica.
VNp si incorpora nella membrana interna e promuove la curvatura della membrana, incapsulando le proteine marcate con VNp nelle vescicole in gemmazione.
Trasferire il terreno ricco di vescicole in un tubo. Centrifugarlo per separare il surnatante ricco di vescicole.
Quindi, filtrare il surnatante per rimuovere i contaminanti residui.
Quindi, far passare il filtrato attraverso un altro filtro a membrana per catturare le vescicole sulla superficie della membrana.
Mettere la membrana in un piatto e aggiungere soluzione salina tamponata con fosfato.
Staccare delicatamente le vescicole e trasferire la sospensione in un tubo pulito.
Sonicare la sospensione per distruggere le membrane delle vescicole e rilasciare le proteine.
Centrifugare il lisato per separare i frammenti di membrana.
Il surnatante risultante contiene proteine ricombinanti purificate, pronte per l'analisi.
Indurre l'espressione della proteina ricombina
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici