Trasferimento di plasmidi F e doppia selezione antibiotica in E. coli

Inizia con le cellule di E. coli del donatore che trasportano un plasmide F in cui un gene di trasferimento è sostituito da un gene di resistenza agli antibiotici.

Queste cellule contengono anche un plasmide di salvataggio che codifica per il gene di trasferimento mancante.

Prendi volumi uguali di cellule di E. coli riceventi con un diverso gene di resistenza agli antibiotici nel loro DNA.

Mescolare entrambe le colture in terreni nutritivi privi di antibiotici e incubare senza agitare.

Il plasmide di salvataggio del batterio donatore esprime il gene di trasferimento, consentendo alla cellula donatrice di costruire un F-pilus.

Il pilo forma un ponte tra due cellule, consentendo il trasferimento unidirezionale del plasmide dal donatore al ricevente, formando transconiuganti.

Agita la miscela per interrompere le coppie di accoppiamento e posizionala sul ghiaccio per evitare ulteriori accoppiamenti.

Individuare la coltura su piastre di agar contenenti antibiotici selezionabili transconiugati e incubare.

I transconiugati, che trasportano entrambi i geni di resistenza agli antibiotici, sopravvivono e formano colonie in presenza di entrambi gli antibiotici, confermando il successo del trasferimen