JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:19 min. • September 26th, 2025
Assumere siringhe contenenti strisce polimeriche prive di antibiotici e caricate con antibiotici.
Riempire le siringhe con una coltura metabolicamente attiva di batteri patogeni.
Incubare le siringhe agitando per garantire un'esposizione batterica uniforme al terreno.
Durante l'incubazione, gli antibiotici della striscia caricata si diffondono nel terreno e inibiscono la crescita batterica.
Nella siringa con la striscia priva di antibiotici, i batteri proliferano.
Raccogliere la sospensione batterica da ogni siringa in provette da microcentrifuga.
Trasferire le aliquote in una piastra multipozzetto.
Aggiungere una miscela di reagenti contenente luciferina, enzima luciferasi e un agente di lisi.
Incubare con agitazione per consentire la lisi batterica, che rilascia componenti cellulari, incluso l'ATP. L'ATP guida la reazione luminescente mediata dalla luciferasi.
Utilizzando un lettore di micropiastre, registrare la luminescenza.
La coltura batterica esposta alla striscia caricata con antibiotici mostra una luminescenza ridotta rispetto alla coltura non esposta agli antibiotici.
Questa luminescenza ridotta conferma l'efficacia antibatterica della striscia caricata con antibiotici.
Posizionare le strisce UHMWPE vergini e caricate con farmaci all'interno di una siringa da tre millilitri. Quindi aspirare la sospensione batterica contenente MHB nella siringa attraverso l'ago inserito fino al segno di 1,5 millilitri.
Posizionare la siringa su un'incubatrice con agitazione fino ai punti temporali indicati di sei ore, e poi ogni giorno fino al settimo giorno. Dopo ogni punto di tempo indicato, estrarre la siringa e dosare il terreno in un tubo da due millilitri. Eseguire un test di vitalità microbica in tempo reale come descritto nel manoscritto utilizzando 100 microlitri di sospensione batterica.